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熒光分光光度計測試的注意事項有哪些

發(fā)布日期: 2020-03-19
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  熒光強度容易受外界因素的影響,如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)、其它溶質(zhì)、表面活性劑等都會(huì )造成熒光強度的變化。嚴格控制測試條件對熒光分析來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。
  熒光分光光度計測試的注意事項有哪些:
 ?、贅悠窇⒃谒拿嫱腹獾氖⒈壬螅晒獬兀┲?,如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。
 ?、谠跓晒夥治鰰r(shí),為了得到穩定可靠的數據,一般需要開(kāi)機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長(cháng)波長(cháng)、低人射光強度及短時(shí)間光照。
 ?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴姸鹊母淖?。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著(zhù)程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過(guò)±3℃,對測試結果幾乎無(wú)影響。
 ?、墚敓晒馕镔|(zhì)是弱酸或弱堿時(shí),溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會(huì )發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強度會(huì )因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例:在pH=7~12的溶液中會(huì )產(chǎn)生藍色熒光,在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如,維生素B2(核黃素)在430~440nm藍光照射下會(huì )發(fā)出綠色熒光,λem為535nm。它在pH=6~7的溶液中熒光強度大,而在pH=11時(shí)熒光消失;但在堿性溶液經(jīng)光線(xiàn)照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會(huì )生成熒光強度比維生素B2強得多的黃光素,并可溶于。利用此性質(zhì)可提高測定的靈敏度和選擇性。
 ?、莘肿咏Y構中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中,熒光效率顯著(zhù)增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著(zhù)提高熒光強度。
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